一分鐘帶你了解鱟試劑
鱟試劑的細胞溶解物是從海洋節(jié)肢動物鱟變形細胞溶解物藍血中提取的生化試劑,低溫凍干,它專門用于細菌內(nèi)毒素檢測和真菌(1,3)-β-D-葡聚糖檢測。

鱟試驗是世界上檢測內(nèi)毒素的好方法,具有簡便、快速、靈敏、準(zhǔn)確的特點,因此被歐美藥典和中國藥典指定為法定內(nèi)毒素檢查法,并被世界各國采用,鱟試劑的細胞溶解物主要產(chǎn)于美國、日本、中國等國家。
鱟試劑的質(zhì)量主要表現(xiàn)在靈敏度、自凝時間、成膠狀態(tài)三個方面:靈敏度穩(wěn)定;自凝時間不小于24h具有一定的緩沖能力和適宜的pH值;反應(yīng)后形成固體凝膠,凝膠安瓿可翻轉(zhuǎn)180度而不損壞,而質(zhì)量差的鱟試劑在存放一定時間(如半年)后,其靈敏度可能會發(fā)生變化,靈敏度的變化會改變測定結(jié)果所反映的供試品中內(nèi)毒素的容許限度,因此,必須選擇有國家批準(zhǔn)文號、質(zhì)量穩(wěn)定的鱟試劑。
鱟試劑按實驗方法可分為凝膠法、動態(tài)濁度法鱟試劑、終點濁度法鱟試劑、動態(tài)顯色法鱟試劑、終點顯色法鱟試劑,都是用來定量檢測內(nèi)毒素的。
凝膠法是利用鱟試劑與內(nèi)毒素發(fā)生凝集反應(yīng)的原理,對內(nèi)毒素進行定性檢測或半定量測定的方法,凝膠法是以觀察是否形成凝膠作為反應(yīng)的終點,該方法簡單、經(jīng)濟,無需特殊測量設(shè)備,可用于定性或半定量測定。
動態(tài)濁度法的特點是:1.精確量化;2.檢測范圍寬,高時可達4個數(shù)量級;3.靈敏度高達0.005EU/ml;4.操作簡單,系統(tǒng)自動檢測分析,一步到位;5.經(jīng)濟實用,所需試劑樣品量少,可減少到50LL ;6.可與微生物檢測系統(tǒng)Elx808(支持IU)和專用軟件TALgent配合使用,一次最多可檢測96個樣本。
終點顯色法和動態(tài)顯色法屬于顯色矩陣法,顯色矩陣法是利用鱟試劑與內(nèi)毒素反應(yīng)產(chǎn)生的凝固酶使特定底物顯色并釋放多少生色團來測定內(nèi)毒素含量的方法。
鱟試劑的制備:
1.將新鮮鱟變形細胞溶解物洗凈,用75%乙醇滅菌,心門采血,加入抗凝劑,制成10-15鱟血;
2.將鱟試劑以750 ~ 800轉(zhuǎn)/分的速度離心,棄去藍色血清,將剩余的白細胞按14的體積比加入懸液洗滌劑中,處理后加入細胞裂解劑,搖勻至血細胞完全裂解,保存,得細胞內(nèi)裂解液;
3.加入體積比為10.8~0.6的CHCl3.2~5搖勻,2.500~3.000rpm離心,收集胞內(nèi)溶液,即鱟試劑原液,加入敏化劑,預(yù)檢,再加入敏化劑,在-45~ 55分裝。
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